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임진록 2 다운로드

PI 3-키나아제 아세술은 앞서 설명한 바와 같이 수행되었다(17). PI 3-키나아제 활성은 PI를 포스파티딜리노시톨포스페이트(PIP)로 전환시킴으로써 IRS-1 또는 2 면역침전제에서 분석하였다. 세포는 용해 완충액 1 ml에서 30분 동안 인큐베이션하여 용해시켰다[20 mm Tris-HCl (pH 7.5), 137 mm NaCl, 1 mm MgCl2, 1 mm CaCl2, 1mm EDTA, 1% 노니데트 P-40, 10% 글리세롤, 5 μg/1 mms.1 mm. 항-IRS-1 또는 -2 항체 응액 아가로즈(20 μl)를 4C에서 1시간 동안 500 μg의 단백질을 함유하는 슈퍼나이트로 배양하였다. 세척 후, 면역침전액을 키나아제 분석 버퍼[20 mm Tris-HCl (pH 7.6), 75 mm NaCl, 10 mm MgCl2, 200 μg/ml PI 및 10 μCi [γ-32P] ATP]의 100 μl에서 재중단시키고, 실온에서 20분 동안 배양하였다. 반응을 1n HCl 100 μl 및 CHCl3-메탄올 200 μl(1:1)의 첨가에 의해 중단하였다. 샘플을 원심분리하고, 하부 유기상을 수확하고 실리카 겔 박층 크로마토그래피 플레이트(Merck, Whitehouse Station, NJ)에 1% 칼륨 옥살레이트를 코팅하였다. 얇은 층 크로마토그래피 플레이트는 CHCl3-CH3OH-H2O-NH4OH (60:47:11.3:2)에서 개발되었으며, 건조되고 자가 방사선 촬영에 의해 시각화되었습니다. 우리나라의 근육분화 억제기전을 추가로 평가하기 위해 한국의 약리억제제인 Y27632의 효과를 조사했다.

H9c2 및 C2C12 근세포 세포를 Y27632의 존재 또는 부재 상태에서 4d에 대해 PM 및 DM에서 배양한 후, 형태학적 변화가 관찰되었고, 근생 마커, 미오제닌 및 미오신 중혈의 발현 수준을 측정하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, A 및 B, 다수의 핵을 포함하는 syncytia는 Y27632의 존재 에서, 심지어 PM에서, 모두 H9c2(도 3A) 및 C2C12 세포(도 3B)에서 증가하였다. 미오제닌 및 MHC의 발현 수준은 또한 PM에서 Y27632 처리 후 강하게 유도되었다(도 3, C 및 D). 이러한 결과와 일치, 4 d myotubes의 가속 된 형성에 대 한 DM에서 Y27632와 myoblasts의 치료 (도 3, A 및 B) myogenin 또는 MHC의 증가 발현, 4 d에 대 한 DM에서 Y27632로 처리 되지 않은 세포와 비교 (도 4 d.